EXPLANTES

El cultivo de tejidos en su acepción amplia puede ser definido como un conjunto muy heterogéneo de técnicas que presentan en común el hecho de que un explante (una parte separada del vegetal que pueden ser protoplastos células desprovistas de pared celular,células, tejidos u órganos) se cultiva asépticamente en un medio artificial de composición química definida y se incuba en condiciones ambientales controladas.

explantacion en plantas

En esta investigación se realizó un análisis del efecto de las sustancia de crecimiento sobre la morfogénesis del callo de Pteris cretica Explantes de hojas jóvenes fueron colocados en el media RM, 1965, al cual se le agregó cisteina 30 mg/1, agar 8 g/1 y sustancias de crecimiento a diferentes concentraciones. La iniciación del callo (fase I) ocurre a los 20 días de cultivo, con media adicionado con 2,4­diclorofenoxiacético (2,4­D) 2 mg/1 y bencilaminopurina (BAP) 2 mg/1. La inducción a la diferenciación (fase II) se apreció en medios solidos y líquidos al suprimir o bajar la concentración del 2j4D en presencia de citocininas. Durante los primeros 30 días de cultivo se observaron fases tempranas de la embriogénesis somática, hasta la formación de estructuras multicelulares. La regeneración del brote fue obtenida en medio sólido con cinetina (k). Se logro una multiplicación masiva de los brotes (fese III) en medios con K o BAP en concentraciones de 0,5 y 1 mg/1. Los brotes evolucionaron a plántulas (fuse IV) en medios con baja concentración de sales: media de Gamborg o RM diluído a la mitad, en presencia de auxinas. El poder regenerativo del callo morfogénico se mantiene a través de los subcultivos; tejidos mantenidos en medios apropiados por tres años conservan su capacidad de desarrollar brotes.
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La potencialidad de desarrollo de explantes de primordios foliares y de hojas, en condiciones in vitro, ha sido estudiada para algunas especies de helechos. MOREL (8) reseñó el cultivo in vitro de selecciones de hojas de Adiantum pedatum así como la regeneración de plántulas. SUSSEX y STEEVES (14) estudiaron el desarrollo in vitro de primordios foliares de Osmunda cinnanomea y STEEVES (13) encontró, en la misma especie, diferencias en el comportamiento de explantes de primordios foliares de acuerdo a su estado de desarrollo.
Por su parte, BRISTOW (1) logró la propagación in vitro de Pteris cretica a partir de secciones de hojas de plantas obtenidas en condiciones in vitro. Igualmente MICHALTX (7) obtuvo la propagación in vitro de la misma especie utilizando primordios foliares como explantes. Ellos utilizaron el 2,4­diclorofenoxiacético (2,4D) para la iniciación y proliferación del callo y lograron su diferenciación bajando la concentración de 2,4D del medio de cultivo, sin necesidad de añadir citocininas.
El helecho P. cretica es una planta ornamental muy decorativa, que tiene gran demanda comercial. Su propagación por los métodos convencionales es bastante lenta y el número de plantas que se produce es muy bajo.
La propagación de esta especie por cultivos de tejidos in vitro constituye un método que asegura la producción masiva de plantas fenotípicamente semejantes a la planta donante, en un tiempo relativamente corto. El objetivo del presente trabajo fue estudiar las condiciones de cultivo de secciones de hojas de plantas de P. cretica cultivadas en condiciones naturales, y analizar los requerimientos hormonales y eventos morfológicos que ocurren en la regeneración de plantas completas, como un medio de propagación clonal masiva de esta especie. superiores.

Fig. 1. Estructura multicelular (embrioide) de P. cretica en etapa avanzada en el medio RM5 líquido (100 x).

 

Fig. 2. Callo con meristemoides de P. cretica en el media R'M5 sólido (40 x).

Fig. 3. Meristemo de P. cretica con primordios foliares, desarrollado de un meristemoide (40 x).

CONCLUSIONES

La edad del tejido en los explantes de P. cretica es determinante en su propagación. En este trabajo se concluye que los ápices de hojas jóvenes son los explantes más apropiados para obtener la regeneración.
El 2,4D es esencial para la inducción a la embriogénesis del callo de P. cretica; para la diferenciación de masas proembriónicas en embrioides, es necesario la adición de citocininas siendo la cinetina la más efectiva.
La regeneración de P. cretica a partir de ápices de hojas jóvenes se obtuvo a través de cuatro fases: Fase I: iniciación del callo, ésta se logró en el media RM adicionado con 2,4D y BAP (2 mg/1). Fase II: inducción a la diferenciación; la formación de embrioides y meristemoides y su desarrollo a brotes se observó con K (1 y 0,5 mg/1) eliminando el 2,4D del media de cultivo. Fase III: multiplicación masiva de los brotes; la rápida multiplicación de los mismos es inducida en medios con K y BAP (en concentraciones de 0,5 y 1 mg/1). Fase IV: formación de plántulas completas; el desarrollo de los brotes a plantulas completas se obtuvo utilizando soluciones salinas menos concentradas, como RM 1/2 o el B5 de Gamborg, en presencia de auxinas.
La adaptación a tierra de las plántulas obtenidas in vitro se logró con bastante éxito a pesar de que la constitución de las raíces obtenidas in vitro es diferente con respecto a las raíces que se forman en plantas cultivadas en condiciones naturales en lo que se refiere a: reducción a la mitad del número de capes de la corteza, disminución de las células de las capas más internas y ausencia de engrosamiento de las paredes de las mismas y presencia del xilema monarco.

imagenes de explantacion en plantas

Fig. 5. Plántulas de P. cretica en el medio B5

Fig. 6. Plantulas de P. cretica mostrando las raíces a los 30 dias de haber sido tratadas con RM 1/2 y d B5 en presencia de auxinas.

El proceso de adaptación a tierra de las plántulas obtenidas in vitro se logró con bastante éxito (Fig. 7). El paso a tierra requirió de unos 15 días de adaptación (una semana aproximadamente en condiciones de alto humedad y el resto en un umbráculo con baja intensidad lumínica). Con este método se logró un 100% de sobrevivencia de las plántulas obtenidas in vitro.

Fig. 7. Plantulas" de P. cretica obtenidas in vitro adaptadas a condiciones de vivero

                                                  ADN

El ácido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN (y también DNA, del inglés deoxyribonucleic acid), es un tipo de acido nucleico, una macromolécula que forma parte de todas las células. Contiene la información genética usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria.
Desde el punto de vista químico, el ADN es un polímero de nucleótidos, es decir, un polinucleótido. Un polímero es un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas entre sí, como si fuera un largo tren formado por vagones. En el ADN, cada vagón es un nucleótido, y cada nucleótido, a su vez, está formado por un azúcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adenina→A, timina→T, citosina→C o guanina→G) y un grupo fosfato que actúa como enganche de cada vagón con el siguiente. Lo que distingue a un vagón (nucleótido) de otro es, entonces, la base nitrogenada, y por ello la secuencia del ADN se especifica nombrando sólo la secuencia de sus bases. La disposición secuencial de estas cuatro bases a lo largo de la cadena (el ordenamiento de los cuatro tipos de vagones a lo largo de todo el tren) es la que codifica la información genética: por ejemplo, una secuencia de ADN puede ser ATGCTAGATCGC... En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucleótidos, en la que las dos hebras están unidas entre sí por unas conexiones denominadas puentes de hidrógeno.
Para que la información que contiene el ADN pueda ser utilizada por la maquinaria celular, debe copiarse en primer lugar en unos trenes de nucleótidos, más cortos y con unas unidades diferentes, llamados ARN. Las moléculas de ARN se copian exactamente del ADN mediante un proceso denominado transcripción. Una vez procesadas en el núcleo celular, las moléculas de ARN pueden salir al citoplasma para su utilización posterior. La información contenida en el ARN se interpreta usando el código genético, que especifica la secuencia de los aminoácidos de las proteínas, según una correspondencia de un triplete de nucleótidos (codón) para cada aminoácido. Esto es, la información genética (esencialmente: qué proteínas se van a producir en cada momento del ciclo de vida de una célula) se halla codificada en las secuencias de nucleótidos del ADN y debe traducirse para poder funcionar. Tal traducción se realiza usando el código genético a modo de diccionario. El diccionario "secuencia de nucleótido-secuencia de aminoácidos" permite el ensamblado de largas cadenas de aminoácidos (las proteínas) en el citoplasma de la célula. Por ejemplo, en el caso de la secuencia de ADN indicada antes (ATGCTAGATCGC...), la ARN polimerasa utilizaría como molde la cadena complementaria de dicha secuencia de ADN (que sería TAC-GAT-CTA-GCG-...) para transcribir una molécula de ARNm que se leería AUG-CUA-GAU-CGC-... ; el ARNm resultante, utilizando el código genético, se traduciría como la secuencia de aminoácidos metionina-leucina-ácido aspártico-arginina-...
Las secuencias de ADN que constituyen la unidad fundamental, física y funcional de la herencia se denominan genes. Cada gen contiene una parte que se transcribe a ARN y otra que se encarga de definir cuándo y dónde deben expresarse. La información contenida en los genes (genética) se emplea para generar ARN y proteínas, que son los componentes básicos de las células, los "ladrillos" que se utilizan para la construcción de los orgánulos u organelos celulares, entre otras funciones.
Dentro de las células, el ADN está organizado en estructuras llamadas cromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la célula se divida. Los organismos eucariotas (por ejemplo, animales, plantas, y hongos) almacenan la mayor parte de su ADN dentro del núcleo celular y una mínima parte en elementos celulares llamados mitocondrias, y en los plastos y los centros organizadores de microtúbulos o centríolos, en caso de tenerlos; los organismos procariotas (bacterias y arqueas) lo almacenan en el citoplasma de la célula, y, por último, los virus ADN lo hacen en el interior de la cápsida de naturaleza proteica. Existen multitud de proteínas, como por ejemplo las histonas y los factores de transcripción, que se unen al ADN dotándolo de una estructura tridimensional determinada y regulando su expresión. Los factores de transcripción reconocen secuencias reguladoras del ADN y especifican la pauta de transcripción de los genes. El material genético completo de una dotación cromosómica se denomina genoma y, con pequeñas variaciones, es característico de cada especie.

 

MEDIOS DE MICROPROPAGACION

Los medios de microprogacion son:

1. por semillas: las semillas son uno de los cuerpos que forman parte del fruto que da origena a una nueva planta , es la estructura mediante la que realizan la propagacion las plantas que por ello se llama espermatofitas (plantas con semillas) las semillas se producen por la maduracion de un ovulo de una angiosperma.

2.por esquejes:
Vitis vinifera micropropagada en agar mediante una técnica de microesquejado.Esquejes o gajos son fragmentos de plantas separados con una finalidad reproductiva. Pueden cortarse fragmentos de tallo e introducirlos en la tierra, para producir raíces. Las plantas enraizadas de esta manera serán idénticas a sus progenitoras, es decir, formarán con ellas un clon. Existen diferentes formas de hacer esquejes, según la fase del periodo de crecimiento en que se corten:

De brotes. Estos esquejes se cortan en primavera de puntas de brotes de crecimiento rápido.
De ramas tiernas. Se cortan algo más tarde que los anteriores, cuando el crecimiento apical de los brotes se ha hecho más lento, pero todavía están verdes.
De ramas semilignificadas. Estos esquejes se cortan a finales de verano, cuando el crecimiento ha disminuido, y los tallos son más gruesos y fuertes.
De ramas lignificadas. Se toman de árboles y arbustos de hoja caduca, durante el periodo de latencia, ramas ya leñosas, también llamadas estacas en este contexto.

3.por division de raices:Raíz
Raíces de un árbol de mangle (Rhizophora), Pará, Brasil.En Botánica, la raíz es un órgano generalmente subterráneo y carente de hojas que crece en dirección inversa al tallo, y cuyas funciones principales son la fijación de la planta al suelo y la absorción de agua y sales minerales. La raíz está presente en todas las plantas vasculares exceptuando algunas pteridófitas que presentan rizoides y algunas plantas acuáticas.[1] La raíz del embrión —llamada radícula— es la primera de las partes de la semilla que crece durante la germinación. La radícula, entonces, se desarrolla originando la raíz primaria con su tejido de protección en el ápice, denominada caliptra.

4.por acobos:
5.por bastagos:
Técnica de producción de vástagos
El favorecer la aparición de vástagos en determinadas especies de árboles, es un método tradicional de administración sostenible del bosque, por el que a los árboles jóvenes se les corta el tronco a un nivel bajo, o a veces a ras del suelo.
En los años siguientes de crecimiento, emergerán muchos nuevos vástagos, y después de que hayan pasado unos años el ciclo comienza otra vez y se vuelven a cortar los troncos gruesos de los vástagos para que emerjan de los pies otros nuevos hasta que estén listos ser cosechados otra vez.

ESTERILIZACIÓN: